Masa ujian dikurangkan dengan ketara daripada kira-kira satu jam kepada beberapa minit oleh kaedah RTF-EXPAR yang baru dilaporkan yang menggunakan pendekatan bebas transkripase terbalik (RTF) untuk penukaran RNA ke dalam DNA diikuti dengan EXPAR (Exponential Amplification Reaction) untuk penguatan pada suhu tunggal.
Mengawal kadar Covid-19 penyebaran memerlukan strategi ujian virus yang tepat dan lebih pantas. RT-PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction), kaedah ujian paling tepat yang sedang digunakan ialah ujian dua langkah yang mengambil masa sekitar 60 minit bagi setiap sampel.
Para penyelidik dari Universiti Birmingham telah melaporkan kaedah baru untuk pengesanan SARS-CoV-2. Ini boleh membolehkan ujian lebih pantas dan cukup sensitif.
Pengesanan RNA virus oleh RT-PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction) melibatkan penukaran RNA virus kepada DNA pelengkap (cDNA) diikuti dengan penguatan cDNA oleh PCR kuantitatif (qPCR). cDNA kemudiannya dikesan menggunakan pewarna pendarfluor. Ini mengambil masa sehingga satu jam.
Masa ujian dikurangkan dengan ketara daripada kira-kira satu jam kepada beberapa minit oleh kaedah RTF-EXPAR yang baru dilaporkan yang menggunakan pendekatan bebas transkripase terbalik (RTF) untuk penukaran RNA kepada DNA diikuti dengan EXPAR (Exponential Amplification Reaction) untuk penguatan pada suhu tunggal. Penguatan yang berlaku pada satu suhu adalah kunci kepada kelajuan, kerana ia mengelakkan langkah pemanasan dan penyejukan RT-PCR yang panjang. Selanjutnya, bahagian DNA yang dikuatkan adalah lebih kecil berbanding RT-PCR. Oleh itu, EXPAR menjana sehingga 108 helai produk DNA dalam beberapa minit. Pembentukan dupleks dipantau, seperti dalam kaedah RT-PCR menggunakan pewarna pendarfluor, SYBR Green.
Menariknya, kaedah baru boleh diubah suai untuk mengesan beberapa penyakit berjangkit lain yang disebabkan oleh virus RNA, contohnya Ebola, RSV, dll.
Sumber:
Carter et al (2020). Pengesanan Sub-5 minit RNA SARS-CoV-2 menggunakan Reverse Transcriptase-Free Exponential Amplification Reaction, RTF-EXPAR. Pracetak. Diterbitkan di medRxiv Disiarkan pada 04 Januari 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
